定量測(cè)試定律俗稱朗伯-比爾定律，其成立條件是待測(cè)物為均一的稀溶液、氣體等，無(wú)溶質(zhì)、溶劑及懸濁物引起的散射；入射光為單色平行光。那么引起朗伯-比爾定律不成立的也基本是上述原因所致。

1、高濃度引起的朗伯-比爾定律的不成立

當(dāng)吸收物質(zhì)濃度很高時(shí)，吸收質(zhì)點(diǎn)距離很近，會(huì)互相影響對(duì)方的電荷分布，使吸收質(zhì)點(diǎn)對(duì)某一特定波長(zhǎng)光的吸收能力改變，從而引起定律不成立。在有些情況下當(dāng)濃度很大時(shí)，會(huì)引起折射率的變化，也會(huì)是定律不成立。同樣在溶液濃度很高時(shí)，質(zhì)點(diǎn)距離很近，會(huì)引起輻射和吸收的重疊，從而降低整體的吸收能力，使定律不成立。

2、非單色光引起朗伯-比爾定律的不成立

就目前國(guó)內(nèi)外分光光度計(jì)制造而言，不可能制造出能夠分出單色光的光度計(jì)，由單色器分光后的光并非純粹的銳線光，而是有一定寬度的光譜。光經(jīng)過樣品后，非特定波長(zhǎng)的光被吸收的很少，進(jìn)入檢測(cè)器，由光信號(hào)轉(zhuǎn)為電信號(hào)，得出數(shù)據(jù)，如果儀器的光譜帶寬過大會(huì)使定律不成立。

3、雜散光過大引起朗伯-比爾定律的不成立

在測(cè)試低濃度樣品時(shí)，看不出雜光對(duì)結(jié)果的影響，但是當(dāng)測(cè)試高濃度樣品時(shí)，雜光對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響就很大了。例如：當(dāng)測(cè)試有一定濃度的樣品時(shí)，其透過率為：3%，若儀器的雜散光是：0.5%，無(wú)疑這對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果影響是很大的。所以雜散光過大會(huì)使定律不成立。

4、懸濁液和混濁液使朗伯-比爾定律不成立

因?yàn)橘|(zhì)點(diǎn)在測(cè)試容器中會(huì)不停的運(yùn)動(dòng)，因?yàn)閼覞嵋夯蚧鞚嵋旱馁|(zhì)點(diǎn)體積比較大，會(huì)直接影響測(cè)試結(jié)果的不穩(wěn)定，當(dāng)質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)到光射的位置會(huì)使透過率變小、吸光度變大，無(wú)法讀出一個(gè)準(zhǔn)確的值，自然使定律不成立。

5、非平行光使定律不成立

目前國(guó)內(nèi)外儀器所采用的光源都是發(fā)散式的，需經(jīng)過透鏡或凹面鏡聚焦，絕大部分儀器經(jīng)過樣品池時(shí)都不是平行的，這樣會(huì)引起光的復(fù)雜變化，使讀數(shù)不準(zhǔn)確，定律不成立。

其它還有很多因素會(huì)使定律不成立，如：膠態(tài)溶液、光度精度和散射的影響等，在此僅提供以上主要因素引起的定律不成立的簡(jiǎn)單介紹，僅供參考。